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            > 利用RNA干涉技術降低曼地亞紅豆杉細胞C-14位氧化紫杉烷含量的方法

            利用RNA干涉技術降低曼地亞紅豆杉細胞C-14位氧化紫杉烷含量的方法

            758   編輯:管理員   來源:中冶有色網  
            2023-03-19 07:29:47
            本發明涉及一種有效降低曼地亞紅豆杉(Taxus?x?media)細胞合成C-14位氧化紫杉烷(C-14?oxygenated?taxoids)的方法,屬于基因工程的技術領域,是通過根癌農桿菌介導的雙元載體轉化系統將針對紅豆杉紫杉烷14β羥基化酶基因(簡稱14OH)片段構建的RNA干涉載體導入到曼地亞紅豆杉(Taxus?x?media)培養細胞中。利用優化的轉化方法成功地獲得了轉基因細胞。PCR-Southern雜交、RT-PCR基因表達分析和化學成分檢測結果顯示:曼地亞紅豆杉細胞轉基因試驗取得成功,轉基因細胞系中14OH基因mRNA表達水平發生顯著地下降。本發明顯著抑制了曼地亞紅豆杉細胞向C-14位氧化紫杉烷的流向,有望使代謝流向包括抗癌藥物紫杉醇(taxol)和及其前體巴可亭III(baccatin?III)在內的C-13位氧化紫杉烷(C-13oxygenated?taxoids),從而為提高紫杉醇的生物合成產量提供一條新方法。
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