本發明提供了一種從頭合成核黃素的大腸桿菌工程菌的構建方法,涉及基因工程領域,所述方法包括:對來自枯草芽孢桿菌的26個合成核黃素的基因進行結構優化,并化學合成,獲得了優化后的26個基因;選擇T7啟動子和終止子控制所述優化后的26個基因的表達,完成優化后的26個基因原核表達單元的拼接;構建了兩個不同復制起點和抗性標記的質粒pBR326和pYB8895,在兩個相容質?;A上組裝了核黃素從頭生物合成途徑4大功能模塊;將帶有4大功能模塊的雙質粒轉入帶有T7RNAP基因的大腸桿菌,獲得了從頭合成核黃素的含枯草桿菌26個基因原核表達單元的大腸桿菌工程菌株。通過搖瓶發酵實驗來檢驗其生成核黃素的能力,最終通過HPLC質譜法測得其核黃素產量達到0.55g/L。
聲明:
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