一種用于檢測樣品中的靶核酸序列存在的方法,該方法包括:在存在以下成分的條件下對所述樣品進行核酸擴增:(a)DNA雙鏈體結合試劑,(b)核酸聚合酶,和(c)含有擴增引物的試劑,該引物能與單鏈形式的所述靶序列雜交,并且,它的5’末端通過化學連接基團與具有標記的探針連接,所述標記過的探針是與所述靶核酸序列相似的序列,以便它能夠與擴增產物上的互補區雜交,并且,其中,所述標記能夠吸收來自所述DNA雙鏈體結合試劑的熒光能量或為所述DNA雙鏈體結合試劑提供熒光能量;以及監測所述樣品的熒光。
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