本發明涉及一種L?半胱氨酸轉運蛋白突變體制備方法,其方法步驟包括:⑴A31V突變體的獲得,以SEQIDNO.2核苷酸序列為模板,SEQIDNO.3、SEQIDNO.4為引物,進行PCR得到的突變體基因eamBA31V;⑵將突變體基因eamBA31V與PMW118質粒分別用EcorI,XbaI雙酶切,酶切產物純化后用T4連接酶22℃連接12小時,連接產物用化學轉化法轉化DH5α感受態細胞,涂布于含氨芐氯霉素的LB固體平板上,37℃過夜培養;⑶對固體培養基上長出的單菌落用PMW118通用引物M13F、M13R進行菌落PCR,將PCR產物測序,驗證正確的單菌落擴大培養,提取質粒PMW118?eamB?A31V。本發明同時將L?半胱氨酸轉運蛋白突變體應用于產L?半胱氨酸大腸桿菌工程菌株,可使大腸桿菌對L?半胱氨酸耐受性提高1.78倍,L?半胱氨酸產量提高18%。
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