本發明公開了一種疏水蛋白?熒光蛋白融合蛋白及其構建與應用,其構建為:(1)化學合成改良過的疏水蛋白mHGFI、熒光蛋白smURFP及HO?1的核苷酸序列;(2)將熒光蛋白基因smURFP的核苷酸序列與HO?1的核苷酸序列連接;再將疏水蛋白基因mHGFI的核苷酸序列和熒光蛋白基因smURFP與HO?1基因的核苷酸序列連接得到融合序列;(3)將融合序列連接到大腸桿菌表達載體上,得到重組表達載體;(4)將重組表達載體轉入宿主大腸桿菌中,得到重組大腸桿菌;(5)破菌后,通過Ni親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層蛋白純化方法得到疏水蛋白?熒光蛋白融合蛋白。本發明對從大腸桿菌中純化出的融合蛋白進行凝血酶檢測,與其他檢測方法相比具有生產成本低、生產效率高、操作簡便、反應迅速、檢測特異性與靈敏度高的優勢。
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