提供了一種將蟲熒光素酶與一種化學本體結合 的方法,具體地是與一類特異的結合劑如抗體,抗原或核酸,以 及更具體地說是一種抗體結合的方法,它包括(a)將蟲熒光素酶 與一種或多種D-蟲熒光素,鎂離子和腺苷三磷酸混合以及(b) 用共價偶聯劑在蟲熒光素酶和結合劑之間進行共價偶聯反應, 其中D-蟲熒光素,鎂離子和/或腺苷三磷酸的量足以保護蟲熒 光素酶的活性免受共價偶聯劑的抑制。優選步驟(a)的操作是 將蟲熒光素酶與其底物在溶液中混合并優選鎂和腺苷三磷酸 二者以腺苷三磷酸鎂的形式存在(Mg2+ATP),可選擇地與D- 蟲熒光素一起使用。本發明第二個方面由本發明的方法提供了 一種包含與活性蟲熒光素酶結合的化學本體的標記的化學本 體。優選化學本體是一種適于特異的結合測試應用的結合劑, 優選是抗體、抗原或核酸。當結合劑是核酸時,優選寡核苷酸, 但可以是多核苷酸或單個核苷酸,并且可被用做雜交探針或鏈 延伸引物,例如PCR引物。最好本體是一種以前曾試圖用于與 蟲熒光素酶偶聯,但結果卻是無活性的抗體。另外還提供了檢 測試劑盒。
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