乙型肝炎病毒siRNA表達載體的構建以及抗病 毒治療應用,本發明屬基因工程技術領域。本發明根據siRNA 的設計原則,分別選擇HBV包膜蛋白(MS)編碼區69nt-87nt, 聚合酶(P)編碼區708nt-726nt,核心蛋白(C)編碼區2052nt- 2070nt的核苷酸序列,設計相應的siRNA序列,用BLAST軟 件進行同源分析證實為HBV高度保守序列后,化學合成單鏈 寡核苷酸,體外經退火形成雙鏈DNA,與真核表達載體 pTZU6+1連接,酶切鑒定和序列測定分析表明成功構建了三種 靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達載體。上述表 達載體通過陽離子脂質體介導與HBV真核表達載體pHBV共轉染肝癌細胞HepG2后,采用免疫熒光和Abbott實驗均證實HBV siRNA具有較強抑制病毒復制和表達的作用。
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